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2013-04-09

ELISA試劑盒酶標(biāo)記抗體的制備酶標(biāo)記抗體的制備方法主要有兩種,即戊二醛交聯(lián)法和過碘酸鹽氧化法。(1)戊二醛交聯(lián)法:戊二醛是一種雙功能團(tuán)試劑,它可以使酶與蛋白質(zhì)的氨基通過它而聯(lián)結(jié)。堿性磷酸一般用此法進(jìn)行標(biāo)記。交聯(lián)方法一步法、兩步法兩種。在一步法中戊二醛直接加入酶與抗體的混合物中,反應(yīng)后即得酶標(biāo)記抗體。ELISA中常用的酶一般都用此法交聯(lián)。它具有操作簡(jiǎn)便、有效(結(jié)合率達(dá)60%-70%)和重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。缺點(diǎn)是交聯(lián)反應(yīng)是隨機(jī)的,酶與抗體交聯(lián)時(shí)分子間的比例不嚴(yán)格,結(jié)合物的大小也不均...

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2013-04-07

化學(xué)試劑純度分類我國的試劑規(guī)格基本上按純度(雜質(zhì)含量的多少)劃分,共有高純、光譜純、基準(zhǔn)、分光純、優(yōu)級(jí)純、分析和化學(xué)純等7種。國家和主管部門頒布質(zhì)量指標(biāo)的主要優(yōu)級(jí)純、分級(jí)純和化學(xué)純3種。(1)優(yōu)級(jí)純,又稱一級(jí)品或保證試劑,99.8%,這種試劑純度zui高,雜質(zhì)含量zui低,適合于重要精密的分析工作和科學(xué)研究工作,使用綠色瓶簽。(2)分析純(AR),又稱二級(jí)試劑,純度很高,99.7%,略次于優(yōu)級(jí)純,適合于重要分析及一般研究工作,使用紅色瓶簽。(3)化學(xué)純(CP),又稱三級(jí)試劑,...

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2013-04-01

簡(jiǎn)述成人胰腺消化、胰島分離方法:尸體胰腺原位灌洗后置UW液中,4℃保存運(yùn)輸。到實(shí)驗(yàn)室后在4℃Euro-Collins液中清除非胰組織,從胰管內(nèi)插入穿刺針,絲線縫扎后用注射器灌注Liberase酶溶液(1.5mg/ml)。胰腺充分膨脹后將胰腺切片,置消化罐中并放入數(shù)顆玻璃珠,加500μm孔徑的不銹鋼絲網(wǎng),旋緊罐蓋。開啟蠕動(dòng)泵將剩余的Liberase酶溶液泵入罐內(nèi),控制罐內(nèi)溫度37℃,手動(dòng)振搖消化罐循環(huán)消化,于10分鐘后開始取樣鏡檢,待大部分胰島分離后用冷的含10%胎牛血清(FB...

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2013-03-29

如何選擇陽性對(duì)照?陽性對(duì)照即是100%出現(xiàn)該結(jié)果的“實(shí)驗(yàn)”組,材料是確定的;陰性對(duì)照則是肯定不會(huì)出現(xiàn)結(jié)果的“實(shí)驗(yàn)組”,材料也是確定的;之所以加引號(hào),是因?yàn)槌藢?shí)驗(yàn)需要驗(yàn)證的變量,其他條件全部都是一樣的,用來排除其他實(shí)驗(yàn)情況對(duì)結(jié)果產(chǎn)生的影響。例如,驗(yàn)證一轉(zhuǎn)基因玉米是否有抗藥性,需要選擇同種的轉(zhuǎn)基因成功的抗藥玉米做陽性對(duì)照,無轉(zhuǎn)基因的做陰性對(duì)照,從而保證除了該基因其他條件一致;一個(gè)成功的實(shí)驗(yàn),通常情況下必須有陽性對(duì)照和陰性對(duì)照排除其他干擾情況如果您需要合適的陽性對(duì)照,請(qǐng)核查數(shù)據(jù)表...

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2013-03-27

干擾素(IFN)是一種廣譜抗病毒劑,并不直接殺傷或抑制病毒,而主要是通過細(xì)胞表面受體作用使細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒蛋白,從而抑制乙肝病毒的復(fù)制;同時(shí)還可增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)、巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的活力,從而起到免疫調(diào)節(jié)作用,并增強(qiáng)抗病毒能力。干擾素是一組具有多種功能的活性蛋白質(zhì)(主要是糖蛋白),是一種由單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子。它們?cè)谕N細(xì)胞上具有廣譜的抗病毒、影響細(xì)胞生長(zhǎng),以及分化、調(diào)節(jié)免疫功能等多種生物活性。實(shí)驗(yàn)步驟1.制備誘生劑:采用NDVF系弱毒株,以雞胚尿囊液...

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2013-03-25

ELISA雙抗體夾心法及間接法的正確操作步驟elisa試劑盒原理ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實(shí)際應(yīng)用中,通過不同的設(shè)計(jì),具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測(cè)抗體的間接法(圖a)、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測(cè)小分子抗原或...

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2013-03-21

軟瓊脂(softagar)實(shí)驗(yàn)一般用來檢測(cè)細(xì)胞的集落形成能力?,F(xiàn)在這種方法越來越多的用于分離癌細(xì)胞,也可以用來確認(rèn)癌細(xì)胞是否具有癌化特性,為進(jìn)一步做腫瘤小鼠移植模型奠定理論基礎(chǔ)。該方法看似簡(jiǎn)單,但如果細(xì)節(jié)掌握不好,往往導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或數(shù)據(jù)缺乏說服力。如果你曾經(jīng)在這個(gè)實(shí)驗(yàn)上栽了跟頭,請(qǐng)不妨在如下幾個(gè)方面進(jìn)行嘗試:1.要確保在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中所使用的瓊脂處于*液體狀態(tài)(80℃),尤其是在做基底時(shí),如果瓊脂凝固過快會(huì)導(dǎo)致基底不均一;2.做瓊脂基底是應(yīng)避免產(chǎn)生小氣泡,一旦有小氣泡產(chǎn)生,應(yīng)...

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