Western實驗中，經過SDS-PAGE電泳分離后的蛋白質樣品需經過“轉膜”步驟，從PAGE膠轉移到膜上固定，才能用各種方法進行Western Blot的檢測和顯示，而且為了防止沒有電場的情況下已經分離的蛋白條帶擴散，轉膜要盡快進行。轉膜是對Westernzui終結果影響zui大的一步，轉膜質量的好壞直接決定了實驗結果的好壞。下面介紹一些實用技巧，趕緊Get起來吧。
 

膜的選擇主要從實驗目的和實驗要求來考慮，例如做分子量小于20kDa的小蛋白，0.45um的膜是不可取的，因為可能會使得蛋白因透過膜孔而造成膜結合的目的蛋白含量不確定，從而影響zui終結果的可靠性。通常小于20KDa的蛋白選擇0.2um的膜，而大于20KDa的蛋白選擇0.45um的膜。常見的膜有NC膜和PVDF膜，區(qū)別如下：

不同分子量的蛋白質選擇的凝膠濃度和轉膜時間也是不同的，原則上高分子量蛋白用低濃度膠，轉膜時間較長，而低分子量蛋白用高濃度膠分離，采用較短的轉膜時間，下表可供參考：

3. 轉膜操作注意事項

（1） 避免直接接觸膜，全程戴手套并使用鑷子，手指上的油脂與蛋白會封閉轉膜效率并易產生背景污斑；

（2） PVDF膜具有疏水性，使用之前需用甲醇浸泡；

（3） 排列三明治時，盡量用干凈的玻璃棒或試管趕走膠和膜之間的氣泡，避免轉膜不均勻；

（4） 確認裁剪的膜和濾紙與凝膠尺寸相同，否則會導致電流不能通過膜，從而轉膜無效；

（5） 雞來源的抗體與PVDF和尼龍膜有較強的結合能力，從而產生較高背景，故如果選擇雞來源的抗體，使用硝酸纖維素膜（NC膜）。

為檢測轉膜是否成功，可以用麗春紅進行染色，將膜放入TBST洗一次，然后置于麗春紅染色工作液中，室溫下?lián)u動染色5分鐘，大量的水洗膜，直至水變清無色，蛋白條帶清晰。