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日期:2019-05-07瀏覽:5722次
一說到培養(yǎng)細胞,胰酶和雙抗是培養(yǎng)過程中*的一部分,對細胞培養(yǎng)是否成功與否有著關鍵性的作用。所以,了解胰酶和雙抗,我們培養(yǎng)細胞的道路就已經走成功了一步。
胰酶
胰酶是什么?
胰酶是一種解離試劑,本質是可以降解蛋白的酶,生物學實驗中常用來把貼壁細胞從貼壁面解離下來和使細胞解聚,也可以用于原代細胞的傳代過程中分散組織。
胰酶使用的濃度是多少?
胰酶濃度:常用0.25%胰酶+0.02?TA作為消化液。
為什么收到的胰酶會有顏色差異?
商品化胰酶溶液需要用干冰運輸,在運輸過程中,胰酶溶液中的二氧化碳與干冰揮發(fā)的二氧化碳可能會極少部分的氣體交換,導致溶液PH的漂移。有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑,因此胰酶PH的變化是肉眼可觀察到的。由干冰運輸過程中導致的PH值的變化很小,PH值會從7.2-8.0變化到了6.8左右,在PH值7.2-8.0的時候,溶液呈淡紅色;PH值6.8左右時呈淡黃色的。因此胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起,歸因于使用干冰運輸。這種顏色的變化是行業(yè)普遍現(xiàn)象,在不同供應商的胰酶產品都會出現(xiàn)。
淡黃色的胰酶溶液能放心使用嗎?
簡單一個字:能
對于胰酶呈黃色的問題,不同品牌也都對此現(xiàn)象進行了測試實驗。變色的胰酶同樣能很好的用于細胞的解離,請放心使用。
細胞消化時,胰酶不去除對細胞的影響
細胞消化時,如果消化液中只有胰酶,不含EDTA,不去除是沒有問題的。
如果消化液中含有胰酶和EDTA,去除。EDTA是一種化學螯合劑,主要作用在于能螯合Ca、Mg離子,使細胞分離。但EDTA不能被血清中和,消化后要*清洗去除,否則細胞易脫壁。胰酶胰酶和EDTA聯(lián)合使用可提高消化效率,所以常二者合用。
胰酶的保存
胰酶可在-20℃下保存一年。隨著時間延長,胰酶的消化能力減弱。胰酶可分裝凍存,在使用前從-20℃冰箱取出。盡量避免在4℃長期保存。
雙抗
什么是雙抗?
雙抗就是青鏈霉素混合液,青鏈霉素混合液(100X) 。是專門用于細胞培養(yǎng)的,可以直接添加到細胞培養(yǎng)液內。
雙抗作用是什么?
雙抗起的作用:抗生素,抑制細菌生長;避免細胞污染。
培養(yǎng)液中需要加入雙抗嗎?
加不加雙抗不是的,視實際情況而定。
如果你實驗室條件足夠好,如果你操作足夠規(guī)范,就盡量不要加雙抗了。相反,如果你實驗條件不夠,操作也沒有把握,還是加的好。的方法是做個實驗對照,看有沒有必要加雙抗。
如何加入雙抗?
在細胞培養(yǎng)液中推薦的青霉素的工作濃度為100U/ml,鏈霉素的工作濃度為0.1mg/ml。
如果加多了話對細胞毒性太大,細胞生長艱難。加入雙抗時,一般先加在培養(yǎng)基里,因為如果是直接在換液傳代滴加的話,那個雙抗的濃度實在不好控制。
誤區(qū):長期使用抗生素,以對抗污染
細胞培養(yǎng)時不應常規(guī)使用抗生素
連續(xù)使用抗生素會促進抗生素耐藥性細胞株的產生,導致輕度污染持續(xù)存在,一旦將抗生素從培養(yǎng)基中去除,這種輕度污染zui終將發(fā)展成大規(guī)模污染
連續(xù)使用抗生素會掩蓋支原體感染及其他隱性污染
有些抗生素會與細胞發(fā)生交叉反應,干擾您研究的細胞過程
雙抗的保存
雙抗通常情況下在-20℃保存一年。由于該試劑在4℃下長期存放是不穩(wěn)定的,應分裝后在-20℃下避光保存。青霉素在2-8的℃存放時間不應超過4天,鏈霉素相對穩(wěn)定一點,在2-8℃可以存放30天左右。切記,雙抗從凍融后里面的基本成分已開始降解。
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