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日期:2019-11-18瀏覽:539次
ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在科研上得到了廣泛的應用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,人ELISA試劑盒如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
一.下面將操作中各個環(huán)節(jié)常出現問題解決辦法總結于下:
1.選擇試劑: 選擇質量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2.標本收集與保存: 避免使用肉眼可見的溶血標本、高脂標本和混濁標本;2-8℃下,標本可放置24-48小時,長期保存需放置-20℃下。請避免反復凍融。
二.人ELISA試劑盒具體請參照:
1.試劑使用中的準備工作及注意事項
2.試劑盒中會有提示,一般需要準備的有: 洗滌液;用前配制;有的試劑盒會標明,配好的4度下一般可以放一個月;如果沒有標明,盡量用新鮮的,不要多配制。顯色液(有A液和B液的),用前15分鐘配制
3. 標準品:有的試劑盒中標準品是已經配制好的,4度保存;有的是要現配制的;按照說明書操作,濃縮生物素結合的二抗和HRP:如果需要配制,試劑盒沒注明配好可以保存多久的話,盡量現配現用(用前15分鐘配制)
4.原則是:試劑盒上沒有指出配制物的儲藏方式的話,應該現配現用;不要怕麻煩;還有小瓶的管子開蓋前要離心,以免蓋子上粘連以后總量不夠
5.加 樣:室溫溫育的試劑,特別是溫育時間比較短的實驗操作的試劑,加樣對數據的影響比較大,特別要注意加樣問題
三.不好的操作原因:
1.不會正確使用加樣器
2.血清或血漿標本分離不好即進行加樣
3.人ELISA試劑盒手工操作中,加樣板過多造成加樣後放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時)
4.加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外
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