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你真的了解細胞凍存嗎?

日期:2021-03-08瀏覽:1099次

1.冷凍保存方法:

(1)傳統(tǒng)方法:冷存管置于4C10分鐘-->-20C30分鐘-->-80C 16~ 18小時(或隔夜)-->液氮槽vaporphase長期儲存。

-20C不可超過1小時,以防止胞內(nèi)冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80C冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

(2)程序降溫:利用已設(shè)定程序的等速降溫機以-1~-3C/分鐘之速度由室溫降至(-80C以下) -120C,再放在液氮槽vaporphase長期儲存。適用于懸浮型細胞與hybridoma之保存。

(3)HAKATA無血清細胞凍存: 加入HAKATA無血清細胞凍存液制成懸液,直接凍于-80°C,可保存≥5年。

2.操作步驟:

(1)冷凍前24-48小時更換半里或全里培養(yǎng)基,使細胞處于指數(shù)生長期。

(2)配制冷凍保存溶液(使用前配制):另取一離心管,加入培養(yǎng)基、血清,逐滴加入二甲基亞礬(DMSO)至20%濃度,即制成雙倍的凍存液,置于室溫下待用。

(3)離心收集培養(yǎng)之細胞,用加血清的培養(yǎng)基重懸起細胞,取少里細胞懸浮液(約0.1m1)計數(shù)細胞濃度及凍前存活率。

(4)取與細胞懸液等里的凍存液,緩慢逐商加入細胞懸液,并晃動試管,制成細胞凍存懸液( DMSO后濃度為5~ 10%),使細胞濃度為1~5x 10*cells/ml,混合均勻,分裝于已標示*之冷凍保存管中,1~ 2nl/mal,并取.少里細胞懸浮液作污染檢測。嚴密封口后,注明細胞名稱、代數(shù)、日期。然后進行凍存。

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