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細胞培養(yǎng)的血清 血清解凍滅活等問題

日期:2021-10-28瀏覽:690次

細胞培養(yǎng)基的配制 

細胞培養(yǎng) 液中添加的血清有牛血清、馬血清、人血清等,其中牛血清是常用的血清,分為胎牛血清和新生小牛血清。胎牛血清是從母牛破腹取出的胎牛中分離出的血清,價格昂貴。新生小牛血清是從剛出生的尚未哺乳的小牛中分離出來的血清,如廠家能做到這一點,新生小牛血清的質量與胎牛血清的質量相差不大。如小牛出生后已哺乳,從這種小牛中取出的血清中可能含有較多的生物活性物質,其質量明顯不如前兩種。


血清的質量,種類及使用的濃度都有可能影響細胞的生長,而不同批次的血清支持細胞生長的能力也不同,尤其是對克隆 細胞的生長,某些批次血清可能含有毒性或抑制細胞生長的物質。注意以下幾點:


(1)需要長期保存的血清必須儲存于-20℃或-80℃低溫冰箱 中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1 個月。由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。


(2)Cyagen提供的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內一起過濾,切勿直接過濾血清。否則會導致營養(yǎng)物質的流失!


(3)瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20 ℃或 -80 ℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1 天。然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20 ℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而出現(xiàn)沉淀。影響使用效果!


(4)熱滅活是指56℃, 30 分鐘加熱已*解凍的血清。加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻。此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement )滅活。除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清的質量。補體參與反應有:細胞毒作用, 平滑肌細胞收縮, 肥大細胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進淋巴細胞和巨噬細胞發(fā)生化學趨化和活化。Cyagen提供的血清是經(jīng)過嚴格處理可以直接使用,不需要特殊的處理,就能夠維持良好的支持效果。


(5)切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會破壞而影響血清質量。


(6)血清中的沉淀物


絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質量。可用離心3000rpm, 5 分鐘去除,也可不用處理。顯微鏡下“小黑點":經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象“小黑點",常誤認為血清受污染。一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長。


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