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人表皮生長因子(EGF)ELISA試盒使用說明書

日期:2023-11-02瀏覽:407次

人表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍:                                                          96T

25pg/ml-480pg/ml

 

使用目的:

本試劑盒用于測定樣本表皮生長因子(EGF)含量。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本表皮生長因子(EGF)水平。用純化的表皮生長因子(EGF)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入表皮生長因子(EGF),再與HRP標(biāo)記的表皮生長因子(EGF)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過CHE底洗滌后底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的表皮生長因子(EGF)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人表皮生長因子(EGF)濃度。


操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

480pg/ml

5號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

240pg/ml

4號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

120pg/ml

3號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

60pg/ml

2號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

30pg/ml

1號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 

 

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

10. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴(yán)格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期

1試劑盒保存:;2-8

2.有效期:6個月

 


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