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日期:2024-11-15瀏覽:19次
檢測范圍:
5ng/L -260ng/L
使用目的:
本試劑盒用于測定小鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中小鼠組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)水平。用純化的小鼠組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入組織型纖溶酶原激活劑(t-PA),再與HRP標記的組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)濃度。
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
240ng/L | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
120ng/L | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
60ng/L | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
30ng/L | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
15ng/L | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、
2. 待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
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