滬鼎詳解細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)問(wèn)題的解決方案

我們?cè)谑酆蠹夹g(shù)服務(wù)中，經(jīng)常接到客戶向我們?cè)儐?wèn)關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題，為方便客戶實(shí)驗(yàn)順利，我司經(jīng)技術(shù)部確定，特對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)問(wèn)題做出詳細(xì)解答。希望在實(shí)驗(yàn)中幫到大家，上海滬鼎的宗旨：以顧客為上帝，真誠(chéng)為大家服務(wù)，上海滬鼎，您身邊的試劑專家.

1.倍增和代數(shù)有什么區(qū)別？
倍增是培養(yǎng)物中細(xì)胞總數(shù)加倍，通常是指細(xì)胞指數(shù)或?qū)?shù)生長(zhǎng)期。代數(shù)是指細(xì)胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過(guò)程的次數(shù)，傳代培養(yǎng)的目的是使細(xì)胞處于低密度以刺激其進(jìn)一步生長(zhǎng)。
2.接收到的凍存細(xì)胞該如何處理？
收到包裝箱后，立即將凍存細(xì)胞從干冰移入液氮中凍存。此過(guò)程盡量快以避免升溫。不要將細(xì)胞儲(chǔ)存在-80℃，這樣會(huì)對(duì)細(xì)胞造成不可挽回的傷害。
3.有多少經(jīng)驗(yàn)才能開(kāi)始正常人類細(xì)胞培養(yǎng)？
推薦有經(jīng)驗(yàn)者在無(wú)菌環(huán)境下用層流凈化罩工作，如果有經(jīng)驗(yàn)的話對(duì)其它細(xì)胞類型也是很有利的。如果你是細(xì)胞培養(yǎng)的初學(xué)者或打算建立細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室，我們會(huì)為你提供幫助。請(qǐng)的細(xì)胞培養(yǎng)專家。
4.原代細(xì)胞與細(xì)胞系有什么區(qū)別？
細(xì)胞培養(yǎng)物來(lái)源于原代外植體或分散的細(xì)胞懸液。通常在這樣的培養(yǎng)物中細(xì)胞增殖形成匯合地單層細(xì)胞或密集地細(xì)胞懸液。根據(jù)傳統(tǒng)定義，*次收獲和接種的細(xì)胞被稱為原代細(xì)胞[Freshney, R.I. （1987）. Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. （New York, Alan R. Liss, Inc.）]. 這類細(xì)胞生命周期有限，在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細(xì)胞zui大的生長(zhǎng)空間，以保持細(xì)胞群中基因型和表型的一致性。
細(xì)胞系是不斷生長(zhǎng)，分化的細(xì)胞群，因其經(jīng)過(guò)遺傳改造，致使其具有無(wú)限增長(zhǎng)的潛能。體外生長(zhǎng)的細(xì)胞系用于醫(yī)療或科研。實(shí)際上，連續(xù)細(xì)胞系可以用大量次培養(yǎng)基培養(yǎng)，隨著代數(shù)的增加細(xì)胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。
需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。
5.當(dāng)我*次植入正常人類細(xì)胞時(shí)需要旋轉(zhuǎn)細(xì)胞去除二甲基亞楓嗎？
*次植入正常凍存細(xì)胞時(shí)，我們不推薦旋轉(zhuǎn)去除二甲基亞楓。離心過(guò)程比殘留二甲基亞楓對(duì)細(xì)胞的傷害更大，尤其是不正當(dāng)?shù)母咚傩D(zhuǎn)。我們的經(jīng)驗(yàn)是如果二甲基亞楓的濃度很低，細(xì)胞不會(huì)受毒害。如果你將1ml細(xì)胞植入已加入15ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中，二甲基亞楓的濃度將小于0.67％，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)負(fù)面影響。實(shí)際上，如果細(xì)胞的接種密度為每平方厘米5000-10000，二甲基亞楓的濃度很低。
6.多久更換一次培養(yǎng)基？
一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。
注意：*次植入凍存的細(xì)胞后，在6-16小時(shí)內(nèi)更換培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡細(xì)胞。
7.凍存的細(xì)胞該如何開(kāi)始培養(yǎng)？
⑴將一管細(xì)胞從液氮罐中取出，注意保護(hù)手和眼睛。
⑵用10秒鐘時(shí)間將小管的蓋子擰松1/4以去除殘留在螺紋處的液氮，然后將蓋子蓋緊。
⑶將小管放入37℃水浴中，輕輕握住并旋轉(zhuǎn)，直到管內(nèi)物體*融化。
⑷將小管立即從水浴中拿出，擦干，轉(zhuǎn)入無(wú)菌環(huán)境。
⑸用70％的酒精沖洗小管，然后擦去多余酒精。
⑹打開(kāi)蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋。用1ml離心管離心內(nèi)容物。
⑺平衡管內(nèi)物，用多聚賴氨酸包被培養(yǎng)瓶（多數(shù)細(xì)胞用T-75的培養(yǎng)瓶）。多數(shù)細(xì)胞類型推薦接種密度為每平方厘米5000細(xì)胞。
⑻蓋好蓋子，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細(xì)胞分布均勻。若需要?dú)怏w交換可打開(kāi)蓋子。
⑼將培養(yǎng)瓶放放培養(yǎng)箱中（37℃,5%CO2,95%空氣）
⑽植入培養(yǎng)后第6-16小時(shí)更換一次培養(yǎng)基以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細(xì)胞。
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