服務(wù)熱線
18221656311
歡迎訪問上海滬鼎生物科技有限公司網(wǎng)站
日期:2013-08-08瀏覽:1521次
三大方法快速檢測與鑒定熱穩(wěn)定腸毒素
大腸桿菌熱穩(wěn)定性腸毒素檢測試劑盒 20次用
利用逆向被動乳膠凝集反應(yīng)檢測大腸菌腸毒素的試劑盒
天然的ST為小分子質(zhì)量多肽,無免疫原性,以往只能用乳鼠胃內(nèi)投服試驗檢測之。近些年來,用偶聯(lián)法使ST獲免疫原性而成功地研制出相應(yīng)抗體,一系列快速檢測ST·的免疫學(xué)方法也隨之形成。現(xiàn)將部分方法簡介如下。
(1) GMl—ELlSA Svennerhotm等研制出抗STl的單抗,并以此建立了檢測ST的GMl—ELISA。其主要步驟為將ST與CT的B亞單位(CT-B)偶聯(lián),再把偶聯(lián)物結(jié)合到用GMl包被的酶標板上,將待檢樣品和ST標準樣品分別稀釋后,再各自與抗ST單抗在室溫下作用1h,加入上述板孔中,再加入HRP標記的抗鼠免疫球蛋白,顯色,測OD值。如待檢菌株培養(yǎng)液濾液能≥50%抑制抗ST單抗與GMl—ST-CTB結(jié)合反應(yīng)即判為陽性。通過與陽性反應(yīng)的ST標準的稀釋度做比較還可確定樣品中ST的濃度。此法既能檢測ST 1a,又可檢測STl,對純化ST的檢測限為0.2~0.4ng,其敏感性高于乳鼠試驗。但對乳鼠法中呈陽性反應(yīng)的腸結(jié)腸炎耶爾森菌的ST卻不起反應(yīng)。
(2)ELISA檢測ST De.Mai等(1983)以過氧化物酶標記抗體,用抗原競爭間接法檢測培養(yǎng)液中STl。定性檢測時底物用5—氨基水楊酸,定量時用鄰苯二胺。此法與乳鼠試驗的相符率為96.7%,無假陽性。‘Thompson等(1984)建立了一種快速ELISA,經(jīng)提高酶標記抗體濃度和競爭作用溫度以及減少底物用量后,可使檢測ST的時間縮短至lh。當用單抗時,該法對ST的檢出限可達3pg/m1。Klipstein等以人工合成的ST(s)和ST(c)分別與豬IgG偶聯(lián)后,并制成兔和羊抗ST血清,還以此建立了檢測ST的雙夾心ELISA。該法*抗體為兔抗ST血清,第二抗體用羊抗ST血清。如用純化的抗ST(c)抗體作為*抗體、第二抗體,則對ST檢測限為140pg/m1,比下降為乳鼠法的1/280,比粗制ST(s)抗體的檢測敏感性增高2857倍,對50株人源ST陽性檢出率為100%,無一假陽性。本法還可檢測豬源ST。
(3)放射免疫法 Giannetla等(1981)以改良的過氧化物酶法標記純化STl,用抗原競爭法檢測待檢菌培養(yǎng)上清液中的STl,其檢測限為50pg/m1的STl,特異性強,重復(fù)性亦好,不同時間測定的誤差不大于5%,對STl和胃腸道多肽均無交叉反應(yīng)。Frant等將豬源菌株431所產(chǎn)的ST與牛血清白蛋白或血藍蛋白偶聯(lián)后,制成兔抗ST血清,另以125I標記的該菌株ST作為檢測標記物,通過待檢ST對標記物的競爭抑制來測定樣品中ST含量,其檢測限達50pg每反應(yīng)管,整個試驗可在一天內(nèi)完成。此法可檢測豬、牛和人源的STl,對IrT及STl均無反應(yīng),且對STl的定量與乳鼠法所得的結(jié)果呈高度相關(guān)。
試劑批發(fā)網(wǎng)高品質(zhì)*低價格ELISA KIT ,采用純進口試劑和進口工藝流程,被越來越多的免疫實驗者重復(fù)使用。
下一篇:酶類試劑的分類及其特異性