一周之中的工作日不過(guò)只有五天，時(shí)間的緊張是否讓您不知該瀏覽哪一個(gè)實(shí)驗(yàn)了呢？不管是何事物，足夠才是zui重要的。今天已經(jīng)周四了，滬鼎推薦本周zui值得關(guān)注的實(shí)驗(yàn)，述制備核提取物的完整過(guò)程。上海滬鼎以質(zhì)量求生存，以信譽(yù)求發(fā)展的精神，精益求精，力求做到更好！
    本次實(shí)驗(yàn)一共需要十二個(gè)步驟，看似麻煩，我們?yōu)槟饤l整理好，讓您了解中更明白。
1、①收集轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)的細(xì)胞：將濃度為5~10×108細(xì)胞/l 的培養(yǎng)液用1 L 的塑料瓶1 850 g 離心20 min，將細(xì)胞收入50 ml 錐形離心管中（每管收2~3 L 培養(yǎng)液中的細(xì)胞）。進(jìn)行步驟2。②收集單層培養(yǎng)的細(xì)胞：?jiǎn)螌蛹?xì)胞長(zhǎng)滿后去掉培養(yǎng)液。用PBS洗1次。將細(xì)胞刮入新鮮PBS液里，倒進(jìn)錐形離心管中。進(jìn)行步驟2。
2、1 850 g 離心10 min。
3①轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)細(xì)胞：測(cè)量壓緊后細(xì)胞的體積。將細(xì)胞重懸于約5倍于其pcv的PBS液中，1 850 g 離心10 min。進(jìn)行步驟4。②單層培養(yǎng)細(xì)胞：測(cè)量pcv，進(jìn)行步驟4。
4、快速地將沉淀的細(xì)胞重懸于5倍體積的低滲緩沖液中，1 850 g 離心10 min。將細(xì)胞沉淀重懸于3倍于原pcv的低滲緩沖液中，放置在冰上10 min，讓細(xì)胞腫脹。
5、在Dounce氏玻璃勻漿器中用B號(hào)研杵緩饅上下抽提10次以上。用臺(tái)盼藍(lán)染色排斥法在顯微鏡下檢査細(xì)胞裂解滑況（應(yīng)大于80%~90%）。
6、3 300 g 離心15 min，保留上清用來(lái)制備S-100細(xì)胞質(zhì)提取物。
7、測(cè)量第6步離心沉淀的壓緊后的細(xì)胞核體積。用1/2 pnv體積的低鹽緩沖液重懸細(xì)胞核（必要時(shí)用Dounce氏玻璃勻漿器勻漿一次）。
8、在輕輕攪拌的同時(shí)，逐滴加入1/2 pnv體積的高鹽緩沖液。終濃度應(yīng)約為300 mmol/l。
9、25 000 g 離心30 min，測(cè)量核提取物的電導(dǎo)率（用上請(qǐng)，見(jiàn)步驟10）。
10、將核提取物加入透析管中，在50倍體積的透析液中進(jìn)行透析，直到提取物的電導(dǎo)率和透析液一致為止（當(dāng)提取物的KCl濃度達(dá)到100 mmol/l 時(shí)）。盡量縮短透析時(shí)間。
11、將提取物從透析袋中移出45 000 g 離心20 min。
12、用Bradford分析法測(cè)定上清中蛋白質(zhì)的濃度。分裝，浸入液氮中速凍，- 80℃保存。
    以上就是制備核提取物實(shí)驗(yàn)的十二個(gè)完整過(guò)程，感謝您對(duì)上海滬鼎的支持！在廣大客戶的支持和全體員工的努力下，公司正在日益發(fā)展和壯大。全體員工孜孜不倦為國(guó)內(nèi)科研事業(yè)單位以及高校等提供的產(chǎn)品服務(wù)！