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滬鼎生物實驗肺炎衣原體過程,讓我們用elisa法來檢驗

日期:2014-03-13瀏覽:1118次

    檢驗肺炎衣原體?我們知道elisa實驗是比較常用的,具有屬于自己的優(yōu)點與特點,被常用于免疫學(xué)檢驗中。今天我們要帶領(lǐng)大家了解的一個實驗就是相關(guān)檢驗肺炎衣原體,下面就來看一看,滬鼎生物實驗肺炎衣原體過程,讓我們用elisa法來檢驗。
    我們這個實驗的標(biāo)本需要取新鮮末梢血或靜脈血。如采血后24h內(nèi)不能進(jìn)行試驗,分離血清后將其保存于一20℃環(huán)境中。在做檢測實驗的時候,使樣本恢復(fù)至室溫。
實驗中所需要用到的試劑:
1、濃縮酶聯(lián)物;
2、標(biāo)本稀釋液;
3、終止液;
4、陽性對照;
5、弱陽性對照;
6、預(yù)包被微孔板;
7、底物A、B;
7、陰性對照。
    選用elisa方法,血清加到包被純化的肺炎衣原體抗原的微滴孔中,使之發(fā)生反應(yīng),然后去除未結(jié)合的抗體,加入結(jié)合有HRP的抗人Ig抗體使之與已結(jié)合的抗體反應(yīng),結(jié)合的HRP與發(fā)色底物發(fā)生顏色反應(yīng)。zui后,終止底物反應(yīng),在酶標(biāo)儀上讀出光密度值。
實驗檢驗過程:
1、配制洗滌液 l瓶濃縮洗滌液加475ml蒸餾水。配好的洗滌液短期內(nèi)可置室溫環(huán)境中,長期可存于2—8℃環(huán)境中。
2、配制酶聯(lián)物 按1:101倍稀釋,即取1u1濃縮酶聯(lián)物加酶聯(lián)物稀釋液1 000ul(根據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量確定稀釋量),未用完的丟棄。
3、待試劑盒平衡至室溫后,待測標(biāo)本按1;51稀釋,即取4tA血清與200u1標(biāo)本稀釋液混合。
4、將稀釋標(biāo)本置37℃環(huán)境中20min。
5、各加100ul陽性、弱陽性、陰性對照及已稀釋待測標(biāo)本上清液于相應(yīng)孔中,空白對照孔加100u1標(biāo)本稀釋液,蓋好反應(yīng)板,置37℃環(huán)境中30min。
6、甩盡板中液體,每孔用200~300ul洗滌液洗5次,每次均需拍干。
7、每孔加酶聯(lián)物100~1,蓋好反應(yīng)板,置37℃環(huán)境中30min。
8、甩盡板中液體,洗5次,每次拍干。
9、加底物A、B各1滴或各50tzl,混勻,置37℃環(huán)境中15min。
10、取出,加終止液1滴,用酶標(biāo)儀450nm測其OD值。若肉眼觀察則不加終止液,直接判斷結(jié)果。
實驗過后,我們要做一個結(jié)果判斷:
1、陰性對照平均OD值須小于0.20。
2、弱陽性對照平均OD值須在0.20—0.65。
3、弱陽性對照與陰性對照的平均OD值之比須≥2。符合以上3個條件時,本試驗結(jié)果可信,否則重復(fù)實驗。
4、若待測標(biāo)本孔顯色比弱陽性對照孔深則判為陽性,反之為陰性。但在弱陽性對照值上下10%范圍內(nèi)再測1次,如確實高于弱陽性對照則可判為陽性。
    以上就是我們?yōu)槟窒淼膶嶒炄^程啦,上海滬鼎生物在這里為大家說幾個實驗中的注意事項,這個實驗結(jié)果須結(jié)合臨床表現(xiàn)、病史作出診斷后,方可采取適當(dāng)臨床處理。還有就是試劑盒雖然含有消除干擾因子的物質(zhì),但仍可能有少量標(biāo)本難以除盡干擾。因此,如某標(biāo)本多項IgM均為陽性,應(yīng)考慮RF的干擾。
    這里是上海滬鼎生物科技有限公司,我公司專業(yè)代理試劑盒的,我們可提供免費代測服務(wù),價格合理!由于本月我公司開展了活動,故全場elisa試劑盒五折*!機(jī)會真的很難得哦,需要的朋友們快快我公司葉吧。

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