日前，我公司錢(qián)在售后問(wèn)題處理過(guò)程中，接到了遵義醫(yī)學(xué)院許老師的實(shí)驗(yàn)，在問(wèn)題描述中，許老師問(wèn)道：“我做的ELISA沒(méi)有試劑盒，都是自己包板封閉孵育。做了很長(zhǎng)時(shí)間，標(biāo)準(zhǔn)曲線的梯度都不好。剛加完顯色劑的時(shí)候梯度還算明顯，但是顯色比較淺，隨著時(shí)間延長(zhǎng)(大概6、7分鐘)以后梯度就不明顯了。終止反應(yīng)后測(cè)得的值梯度就沒(méi)有了。"請(qǐng)問(wèn)這是怎么回事？

    關(guān)于許老師的疑問(wèn)，錢(qián)為之安排的技術(shù)員解析道：

    ①樣本中有能夠催化底物的物質(zhì)，沒(méi)洗下來(lái)。

    ②包被、酶標(biāo)重新做梯度，先用較低的濃度把梯度摸索好，然后再優(yōu)化靈敏度，zui后調(diào)出所需的靈敏度、線性范圍。

    ③是不是酶濃度太高，導(dǎo)致zui后顯色結(jié)果都是高的？

    ④包被-酶標(biāo)系統(tǒng)不匹配或者酶標(biāo)的非特異反應(yīng)太強(qiáng)，或者酶標(biāo)儀讀數(shù)范圍不夠，或者干脆酶標(biāo)儀壞了。

    ⑤有條件的話，可以把酶免的蛋白系統(tǒng)移植到板式化學(xué)發(fā)光上，加完底物三分鐘讀數(shù)，這樣可能比較適合你。

    ⑥酶是自己標(biāo)的么，見(jiàn)過(guò)有人把酶給標(biāo)壞了出現(xiàn)這種情況的，HRP的話，比例不要太高，酶掛的太多了也不好的。 

    ⑦剛加完顯色劑時(shí)梯度明顯：顯色液是不是從高濃度向低濃度孔加的啊。

    ⑧蛋白系統(tǒng)靈敏度夠的話，顯色十分鐘就差不多了。

    看到我公司的問(wèn)題分析內(nèi)容后，許老師再贊上海滬鼎的服務(wù)效率好。以上內(nèi)容就是錢(qián)今天給大家?guī)?lái)的新學(xué)期ELISA曲線問(wèn)題解析，了解更多。