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日期:2015-08-20瀏覽:2138次
至今為止,抗原修復(fù)有許多種方法,在這些方法中,有的是根據(jù)抗體的要求來進行,有的是根據(jù)抗原的表達程度來進行,我們則對每種病例每項檢測,都要求必須進行抗原修復(fù),以達到抗原全面表達的*狀態(tài)。
1. 真空負壓抗原修復(fù)法:
① 切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇真空負壓處理5分鐘。
③自來水洗,蒸餾水洗。
④0.01M檸檬酸鹽緩沖液(PH6.0),真空負壓干燥箱預(yù)先調(diào)至95 ℃,真空負壓處理10分鐘。
⑤待修復(fù)注降至室溫的一,PBS洗3次,隨后按選好的免疫組化染色方法進行染色。
2. 微波輻射抗原修復(fù)法:
①切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇處理10分鐘。
③自來水洗,蒸餾水洗。
④ 0.01 M檸檬酸鹽緩沖液(PH6.0),于微波爐內(nèi)微波輻射10分鐘,如檢測Er和Pr則需要20輻射分鐘左右。
⑤待修復(fù)液降至室溫后,PBS洗3次,隨后按選好的免疫組織化學(xué)的染色方法進行染色。
3. 高壓抗原修復(fù)法:
①切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。
③自來水洗,蒸餾水洗。
④切片放入抗原修復(fù)液中,邊同容器放入高壓鍋中加熱至沸騰。蓋上壓力閥至噴汽后持續(xù)1-4分鐘。
⑤待修復(fù)液恢復(fù)至室溫后,PBS洗3次,隨后按選好的免疫組織化學(xué)染色方法進行染色。
4. 隔水熱抗原修復(fù)法:
①切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。
③自來水洗,蒸餾水洗。
④切片放入0.01 M檸檬酸鹽緩沖液(PH0.6)中,邊同容器一起放入水溶鍋中加熱,其間應(yīng)不斷用溫度計測其溫度,待抗原修復(fù)液的溫度達到有效溫度后(92 ℃)。即開始計時,持續(xù)40分鐘。
⑤待抗原修復(fù)液恢復(fù)至室溫后,PBS洗3次,隨后按選定好的免疫組化染色方法進行染色。
5. 電爐加熱抗原修復(fù)法:
①切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。
③自來水洗,蒸餾水洗。
④ 將切片放入抗原修復(fù)液中于電爐上加熱,不時用溫度計測量溫度,當(dāng)達92 ℃后,即可拔離電源,當(dāng)溫度低于92℃時,再插上電源,如此反復(fù)持續(xù)至10分鐘左右。
⑤待抗原修復(fù)液降至室溫后,PBS洗3次,隨后按選定的免疫組化染色方法進行染色。