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日期:2015-09-23瀏覽:1312次
為什么選擇ELISA試劑盒?
以TNF-a為例,Meso Scale Discovery? Vplex電化學(xué)發(fā)光試劑盒以0.04pg/mL的靈敏度是普通ELISA(7 pg/mL左右)的100多倍。如果實(shí)驗(yàn)樣本中的TNF-a低于7pg/mL,這就意味著實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)會(huì)無法檢測(cè),實(shí)驗(yàn)沒有定量結(jié)論。另外一個(gè)案例,臨床常規(guī)測(cè)定普通CRP的方法檢測(cè)線性一般為3~200mg/L,而預(yù)測(cè)心血管事需要更高靈敏度的CRP,超敏或高敏CRP (hs-CRP)。
ELISA試劑盒檢測(cè)什么樣本?試驗(yàn)周期多長(zhǎng)?
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
如實(shí)驗(yàn)研究周期較長(zhǎng),ELISA試劑盒盡量選擇一個(gè)批次的,以防止不同批次間的差異。然而由于普通ELISA有效期在3-12個(gè)月,而實(shí)驗(yàn)周期往往在1-2年以上,一些長(zhǎng)期臨床實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目甚至在5-10年,因而經(jīng)常面臨不同批次的挑戰(zhàn)。而Meso Scale Discovery?Vplex試劑盒經(jīng)過54個(gè)月穩(wěn)定性測(cè)試。