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ELISA的影響因素——固相載體

日期:2016-01-13瀏覽:2561次

    所有的ELISA工作者都知道Elisa試劑盒的測定,受很多方面影響,這也是ELISA檢測中的重要部分,稍有不慎就會(huì)滿盤皆輸。那么今天我們就來談?wù)勂渲械囊环N影響因素——固相載體。
    固相載體:可溶性抗原或抗體吸附于固相載體而成為不溶形式,這是進(jìn)行酶標(biāo)記測定的基本條件。許多物質(zhì)可作為固相載體,如纖維素、交聯(lián)右旋糖苷、瓊脂糖珠、聚丙烯、聚苯乙烯、聚乙烯及聚氯乙烯等等。但在ELISA中zui常用的是聚苯乙烯或聚氯乙烯微量反應(yīng)板及塑料管。由于微量反應(yīng)板所用試劑量少,操作方便,適合于大規(guī)模應(yīng)用。國產(chǎn)聚苯乙烯微量反應(yīng)板(上海塑料三廠出品)目前已大量應(yīng)用于ELISA測定,并且獲得了滿意的結(jié)果。但每批微量反應(yīng)板對(duì)抗原或抗體蛋白質(zhì)的吸附性能是有顯著差別的。實(shí)驗(yàn)證明,吸附效果似乎與塑料的類型及其表面性質(zhì)有關(guān)。特別是塑料制品在加工過程中因工藝不同或受其他因素的影響而造成吸附性能的極大差異,甚至*喪失吸附能力。因此,對(duì)每批制品在使用前,必須經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室鑒定,鑒定的方法和標(biāo)準(zhǔn)是對(duì)每批購置的微量反應(yīng)板或塑料管抽樣,用0.2ug/ml純化的正常人IgG進(jìn)行包被,經(jīng)洗滌后加酶標(biāo)記抗人球蛋白進(jìn)行反應(yīng),再經(jīng)孵育洗滌,加底物顯色終止反應(yīng)后,逐孔在酶標(biāo)比色計(jì)中測定其消光值、光密度(O.D值)。一般認(rèn)為全板中每兩孔間O.D值的誤差不超過10%為合格。如果中間孔與四周孔O.D值相差太大,或者反應(yīng)板的這一邊與另一邊凹孔的O.D值相差大,均不合格。此外,還要檢查陽性和陰性參考血清O.D值是否有明顯差別。一般要求有10倍左右的差異為合格,微量反應(yīng)板或塑料管在使用前并不一定通過特殊處理。用蒸餾水沖洗即可應(yīng)用。

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