在Elisa實驗步驟中，溫育是不可 HUO 缺的一項要點。而顯色是Elisa中的*后一步溫育反應，此時酶催化無色的底物有色的產(chǎn)物。我公司每周都有*新技術分享給您，今天上海勁馬公司帶給您的*新技術是Elisa實驗步驟溫育反應之顯色：

   反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內(nèi)，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助于加速顯色進行。在定量測定中，加入底物后的反應溫度和時間應按規(guī)定力求準確。定性測定的顯色可在室溫進行，時間一般不需要嚴格控制，有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當縮短或延長反應時間，及時判斷。

   OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應20-30分鐘后即不再加深，再延長反應時間，可使本底值增高。

   OPD底物液受光照會自行變色，顯色反應應避光進行，顯色反應結(jié)束時加入終止液終止反應。OPD產(chǎn)物用硫酸終止后，顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色。

   TMB受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺上，邊反應觀察結(jié)果。但為保證實驗結(jié)果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)定的適當時間閱讀結(jié)果。TMB經(jīng)HRP作用后，約40分鐘顯色達 DING 峰，隨即逐漸減弱，至2小時后即可 WAN 全消退至無色。TMB的終止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反應終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間(12-24小時)不褪，是目視判斷的良好終止劑。此外，各類酸性終止液則會使藍色轉(zhuǎn)變成黃色，此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。