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日期:2023-11-23瀏覽:273次
AGES就是糖基化終末產物的英文簡寫,它是非酶糖基化反應(Maillard反應)的終末產物。是指蛋白質、脂質或核酸等大分子在沒有酶參與的條件下,自發(fā)的與葡萄糖或其他還原單糖反應所生成的穩(wěn)定的共價加成物。本試劑盒用于測定斑馬魚血清,血漿及相關液體樣本中晚期糖基化終末產物(AGEs)含量。那么在ELISA實驗中有哪些注意事項呢,滬鼎生物小編為大家總結ELISA實驗操作注意事項。
一、實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中斑馬魚晚期糖基化終末產物(AGEs)水平。用純化的斑馬魚晚期糖基化終末產物(AGEs)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入晚期糖基化終末產物(AGEs),再與HRP標記的晚期糖基化終末產物(AGEs)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的晚期糖基化終末產物(AGEs)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中斑馬魚晚期糖基化終末產物(AGEs)濃度。
二、標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
三、注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
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