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試劑盒檢測(cè)方法內(nèi)容包括了哪些?

日期:2014-09-18瀏覽:1233次

    根據(jù)小鼠elisa試劑盒的檢測(cè)目的和操作方式的分析來(lái)看有三種基本方法,且在實(shí)驗(yàn)前要有相關(guān)的準(zhǔn)備與了解,那么試劑盒的檢測(cè)方法內(nèi)容包括了哪些呢?上海滬鼎說(shuō)給您聽(tīng):
 1. 雙抗體(原)夾心法:
    檢測(cè)抗原(體)的常見(jiàn)方法,應(yīng)用針對(duì)抗原兩個(gè)不同決定族的兩種單抗分別作為固相載體和酶標(biāo)抗體檢測(cè)溶液中的抗原(適用于二價(jià)以上抗原,不能測(cè) 小分子半抗原)。
 2. ELISA試劑盒間接法:
    檢測(cè)抗體的方法,利用酶標(biāo)記的抗抗體(第二抗體)檢測(cè)已與固相抗原結(jié)合的抗體。
 3. 競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè):
    抗原或小分子半抗原、抗體,以測(cè)抗原為例,使待測(cè)抗原和酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合,結(jié)果如待測(cè)抗原含量越多,與固相抗體結(jié)合的酶標(biāo)抗原就越少,顯色越淺,二者呈負(fù)相關(guān)。
    
·ELISA試劑盒分類(lèi)有這兩種
  1. 采用雙抗體二步夾心法測(cè)定標(biāo)本中各種動(dòng)物相關(guān)指標(biāo)的水平。
  2. 采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。
   ELISA試劑穩(wěn)定、易保存、操作簡(jiǎn)便,既可以做定性試驗(yàn)也可以做定量分析等優(yōu)點(diǎn),已廣泛應(yīng)用于微生物學(xué)、寄生蟲(chóng)學(xué)、腫瘤學(xué)和細(xì)胞因子等領(lǐng)域。影響因素較多,加強(qiáng)質(zhì)量管理才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn)。
·在小鼠elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之前,您需要準(zhǔn)備:
  1. 應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出,室溫放置至少30分鐘。
  2. 準(zhǔn)備各種實(shí)驗(yàn)儀器及材料,如微量移液器,吸頭,醫(yī)用蒸餾水等。
  3. 濃縮洗液與醫(yī)用蒸餾水1:19倍稀釋后成為應(yīng)用洗滌液。
  4. 濃縮樣品稀釋液與醫(yī)用蒸餾水1:4倍稀釋成應(yīng)用樣品稀釋液。 
  5. 用ELISA試劑盒應(yīng)用樣品稀釋液來(lái)稀釋樣品,按照1:100的體積比來(lái)稀釋樣品如10μl的樣品加入到1ml的應(yīng)用樣品稀釋液中,充分混勻待用。
    
·ELISA試劑盒洗滌次數(shù)的經(jīng)驗(yàn)法則
    洗滌次數(shù)越多,背景越低。太多次的洗滌會(huì)降低信號(hào)強(qiáng)度,使其難以測(cè)定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復(fù)洗滌三次。不過(guò)ELISA板的商會(huì)對(duì)洗滌次數(shù)提出建議。一般而言,商包被平板需要的洗滌次數(shù)比用戶(hù)包被的平板要少。對(duì)于用戶(hù)包被的ELISA板,必須優(yōu)化洗滌次數(shù)。
    控制洗滌量和洗滌次數(shù)的另一種方法是加入過(guò)量的洗滌液。一般來(lái)說(shuō),96孔板的每個(gè)孔能容納330至460μl。不過(guò),有些自動(dòng)化洗板機(jī)可設(shè)置程序,分配遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出這個(gè)量的洗滌液,比如1ml。它是如何做到的呢?上海滬鼎生物技術(shù)表明:其實(shí)很簡(jiǎn)單,就是在分液的同時(shí)打開(kāi)吸液功能。換句話(huà)說(shuō),隨著分液器分配更多的液體,抽吸器也將液體吸出。這種技術(shù)能增加洗滌量,但不會(huì)溢出到其他孔中。
·ELISA試劑盒抽吸
    還有一些參數(shù)會(huì)影響洗滌步驟的效果。這些參數(shù)包括吸液高度和吸入位置,這兩者都能調(diào)整,以降低背景和差異。殘留液體中包含未結(jié)合的抗原或抗體,它們會(huì)增加背景信號(hào)。殘留量越小,殘留液體越少,轉(zhuǎn)移到下一步的干擾液體也就越少。
    吸液高度會(huì)明顯影響殘留量;如果洗滌吸頭與反應(yīng)孔底部的距離稍大,那就會(huì)讓殘留量急劇增加。反之,如果試劑盒洗滌吸頭壓著反應(yīng)孔底部,那么也會(huì)使吸液效率降低,殘留量增加。
       

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