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產(chǎn)品型號(hào):GA
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
所在地:上海市
更新時(shí)間:2016-03-30
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
品牌 | R&D/美國(guó) |
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一、“人糖化白蛋白(GA)ELISA試劑盒”詳細(xì)參數(shù)
【檢測(cè)方法】:酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)
【產(chǎn)品性狀】:96T/48T,盒裝液體(兩種統(tǒng)一規(guī)格)
【貯藏條件】:2-8°C
【產(chǎn)品有效期】:二年,我公司Elisa試劑盒均為批次,可放心購(gòu)買。
【產(chǎn)品主要成分】:酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等。
【種屬】馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉(cāng)鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動(dòng)植物。
【產(chǎn)品單價(jià)】(具體折扣),可免費(fèi)代測(cè),含稅含運(yùn)費(fèi)。
【標(biāo)本】血清、血漿、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等
注:標(biāo)本必須為液體,不含沉淀。
二、“人糖化白蛋白(GA)ELISA試劑盒”的四大特性
1.特異性強(qiáng):不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
2.重復(fù)性好:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
3.穩(wěn)定性高:實(shí)驗(yàn)效果很穩(wěn)定。
4.超靈敏度:zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品,稀釋度和樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
三、“人糖化白蛋白(GA)ELISA試劑盒”具體操作方法
以雙抗體夾心法為例展示:
1、雙抗體夾心法檢測(cè)抗原
操作步驟如下:
1)將特異性抗體與固相載體結(jié)合,形成固相抗體。洗滌除去尚未結(jié)
合的抗體及一些雜質(zhì)。
2)加入待測(cè)標(biāo)本,保溫反應(yīng)。標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。
3)加酶標(biāo)抗體,保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。
4)加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過(guò)比色,測(cè)知標(biāo)本中抗原的量。在臨床檢驗(yàn)中,此法適用于檢驗(yàn)各種蛋白質(zhì)等大分子抗原,例如 HBeAg、HBsAg、hCG 、AFP等。只要獲得針對(duì)受檢抗原的特異性抗體,就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。如抗體的來(lái)源為抗血清,包被和酶標(biāo)所使用的抗體分別取自不同種屬的動(dòng)物。如應(yīng)用單克隆抗體,一般選擇兩個(gè)針對(duì)抗原上不同決定簇的單抗,分別用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物。這種雙位點(diǎn)夾心法具有很高的特異性,而且可以將受檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗體一起保溫反應(yīng),作一步檢測(cè)。
在一步法測(cè)定中,當(dāng)標(biāo)本中受檢抗原的含量很高時(shí),過(guò)量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合,而不再形成"夾心復(fù)合物"。類同于沉淀反應(yīng)中抗原過(guò)剩的后帶現(xiàn)象,此時(shí)反應(yīng)后顯色的吸光值(位于抗原過(guò)剩帶上)與標(biāo)準(zhǔn)曲線(位于抗體過(guò)剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同,如按常法測(cè)讀,所得結(jié)果將低于實(shí)際的含量,這種現(xiàn)象被為鉤狀效應(yīng)(hook effect),因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)曲線到達(dá)高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時(shí),反應(yīng)甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。因此在使用一步法試劑測(cè)定標(biāo)本中含量可異常增高的物質(zhì)(例如血清中 HBsAg、AFP 和尿液 hCG 等)時(shí),應(yīng)注意可測(cè)范圍的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應(yīng)。
四、客戶收集樣品要求
·客戶需提供待檢測(cè)抗體和包被用抗原。
·檢測(cè)的樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清、人和動(dòng)物的血清、血漿。
·樣本收集后應(yīng)立即-20℃保存,若長(zhǎng)期保存應(yīng)-70℃。
·樣本量的要求:若一個(gè)指標(biāo)做復(fù)孔檢測(cè)應(yīng)不少于250ul,做單孔檢測(cè)應(yīng)不少于120ul。建議若客戶樣本量充足提供500ul以上。
·客戶的樣本收集后,立即按要求保存,切忌反復(fù)凍融。外地客戶郵寄需要用干冰運(yùn)輸。郵寄前請(qǐng)與溝通確認(rèn)。
五、Elisa試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品(480ng/L) 0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說(shuō)明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)
六、Elisa試劑盒標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測(cè)含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
七、操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
240ng/L 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
120ng/L 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
60ng/L 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
30ng/L 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
15ng/L 1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此重復(fù)5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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