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產(chǎn)品型號(hào):HS
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
所在地:上海市
更新時(shí)間:2016-06-06
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
品牌 | R&D/美國(guó) |
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一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
【產(chǎn)品名稱】:雞硫酸類肝素(HS)ELISA試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:96T 48T
產(chǎn)品品牌:滬鼎生物
樣品類型 血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清等樣品類型
檢測(cè)方法 酶聯(lián)免疫法
特 異 性 公司ELISA試劑盒具有較高的靈敏度和出色的特異性
交叉反應(yīng) 由于當(dāng)前的酶聯(lián)免疫科學(xué)技術(shù)和知識(shí)有限,現(xiàn)有技術(shù)不可能完成藥物檢測(cè)的靶抗原之間和所有其他物種的類似物。因此,交叉反應(yīng)可能仍然存在
樣 本 量 50-100 μL
實(shí)驗(yàn)時(shí)間 1–4.5h
儲(chǔ)存條件 2-8°C
儲(chǔ)存方法 可以存儲(chǔ)在2 - 8°C長(zhǎng)達(dá)1個(gè)月(專家建議:4°C恒溫保存,酶免試劑盒實(shí)驗(yàn)效果更佳)。對(duì)于長(zhǎng)期存儲(chǔ),請(qǐng)?jiān)?20°C的存儲(chǔ)。盡量保持試驗(yàn)板在密封鋁箔袋,避免潮濕
有 效 期 6 months
使用優(yōu)點(diǎn) ELISA試劑盒可特異性定量測(cè)定疾病相關(guān)蛋白,包括細(xì)胞因子、趨化因子、β淀粉樣蛋白與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)靶標(biāo)。
■靈敏,準(zhǔn)確和*的性能
■用血清、血漿、組織培養(yǎng)上清或裂解產(chǎn)物進(jìn)行過驗(yàn)證
■在半天內(nèi)可完成的現(xiàn)成,方便的檢測(cè)
二、實(shí)驗(yàn)原理:
用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗該指標(biāo)抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗該指標(biāo)抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。
三.ELISA常用的幾種方法:
1、雙抗體夾心法測(cè)定抗原
將抗原免疫*種動(dòng)物獲得的抗體吸附于固相表面;
加抗原,形成抗原-抗體復(fù)合物;
加抗原免疫第二種動(dòng)物獲得的抗體,形成抗體抗原抗體復(fù)合物;
加酶標(biāo)抗抗體(第二種動(dòng)物抗體的抗體);
加底物。底物的降解量=抗原量。
2、直接法測(cè)定抗原
將抗原吸附在載體表面;
加酶標(biāo)抗體,形成抗原—抗體復(fù)合物;
加底物。底物的降解量=抗原量。
3、間接法測(cè)定抗體
將抗原吸附于固相載體表面;
加抗體, 形成抗原-抗體復(fù)合物;
加酶標(biāo)抗體;
加底物。 測(cè)定底物的降解量=抗體量。
四.“雞硫酸類肝素(HS)ELISA試劑盒”樣品收集、處理及保存:
1).細(xì)胞培養(yǎng)上清:
適用于檢測(cè)體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無菌管收集細(xì)胞上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
2)細(xì)胞:
用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次,調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104-106/ml 左右,通過反復(fù)凍融,使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,或者細(xì)胞超聲粉碎,離心取上清液檢測(cè)。
3)血清:
在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測(cè)。
4)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
5)體液:
包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
6.)組織標(biāo)本:
切取組織標(biāo)本,稱取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿,以2000-3000 rmp離心20 分鐘,收集上清進(jìn)行檢測(cè)。
樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
7)保存:
如果樣品不能立即檢測(cè),應(yīng)將其分裝,-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
五.操作步驟:
1)取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置30分鐘。
2)分組:取出96孔板,根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組(6個(gè)濃度)、空白孔、待測(cè)樣品組。
3)標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:準(zhǔn)備小試管6 只,依次編好號(hào)碼,先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul,然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul加入一只已編好號(hào)的試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul加入第三只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第四只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul加入第五只試管中,充分混勻;然后在該試管中取100ul,棄掉。第六只試管作為0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。
注:為減少實(shí)驗(yàn)誤差,保證準(zhǔn)確性,建議設(shè)置復(fù)孔。
4)加樣:依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中;空白對(duì)照孔加入50ul的蒸餾水;其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標(biāo)記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
5)溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
6)洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒棄去,如此重復(fù)5 次,拍干。
7)加酶標(biāo)溶液:標(biāo)準(zhǔn)品組、待測(cè)樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液(空白對(duì)照孔除外)。
8)溫育:酶標(biāo)板用封板紙密封后,放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí)。
9)洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置15-30s,充分清洗酶標(biāo)板5次,用吸水紙*拍干。
10)顯色:各孔加入顯色劑A液50ul后,再加入顯色劑B液50ul。
11)終止:25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘,加入50ul終止液。
12)讀板:在450nm波長(zhǎng)讀取各孔的OD值。
注:讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi),以免影響準(zhǔn)確性。
六.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法:
可以采用各種繪圖軟件來繪制ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線,我公司以“Curve Exert1.3”軟件為例,繪制的ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線如下:
七.?dāng)?shù)據(jù)計(jì)算:
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,即為樣品的實(shí)際濃度。
八.“雞硫酸類肝素(HS)ELISA試劑盒”必知項(xiàng):
1. 水溶性、低黏度、無腐蝕、不易燃、*。
2. 所采用的方法特異性好,靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度。
3. 所用標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)準(zhǔn)參考物符合推薦標(biāo)準(zhǔn)和要求。
4. 貯存期至少為1年。
九.配送服務(wù):
產(chǎn)品包裝:在采樣、發(fā)送、運(yùn)輸過程中有保冷溫度要求的,公司均采用加厚款生物保溫箱,內(nèi)裝生物冰袋,有效的控制產(chǎn)品溫度,保證貨物質(zhì)量不受影響,同時(shí)并填充大量EPE發(fā)泡棉,具有*的緩沖彈性,它就像成千上萬的小彈簧緊緊地保護(hù)在郵寄物品周圍,它能有效的吸收嚴(yán)酷的沖擊力,使郵寄物品免于破損,保證貨物完好送達(dá)您手。
物流快遞:鑒于各快遞在全國(guó)各地承諾超配送范圍與全國(guó)行政區(qū)劃分有較大差異,以及快遞會(huì)對(duì)其配送范圍內(nèi)進(jìn)行不定期調(diào)整,我們目前無法實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確定位,但我們會(huì)盡力協(xié)助您解決問題。 同時(shí)我們還為為上海市本地客戶可提供送貨上門服務(wù),1個(gè)工作日送達(dá)。我司承諾,保障大家的貨物*時(shí)間寄送,為大家提供快速、準(zhǔn)確、安全、優(yōu)質(zhì)的配送服務(wù)。