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基礎(chǔ)信息Product information
產(chǎn)品名稱:

HDL,進(jìn)口雞高密度脂蛋白elisa試劑盒

產(chǎn)品型號:

廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

所在地:上海市

更新時間:2017-07-11

產(chǎn)品簡介:

HDL,進(jìn)口雞高密度脂蛋白elisa試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中雞高密度脂蛋白(HDL)的含量。

產(chǎn)品特性Product characteristics
品牌BIM

本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中雞高密度脂蛋白HDL)的含量。

有效期:6個月

保存條件:2-8℃

本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷

實(shí)驗(yàn)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被雞高密度脂蛋白(HDL)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雞高密度脂蛋白(HDL)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。

二、“HDL,進(jìn)口雞高密度脂蛋白elisa試劑盒”的四大特性

1.特異性強(qiáng):不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。

2.重復(fù)性好:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

3.穩(wěn)定性高:實(shí)驗(yàn)效果很穩(wěn)定。

4.超靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品,稀釋度和樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

三、“HDL,進(jìn)口雞高密度脂蛋白elisa試劑盒”具體操作方法

以雙抗體夾心法為例展示:

1、雙抗體夾心法檢測抗原         

操作步驟如下:

1)將特異性抗體與固相載體結(jié)合,形成固相抗體。洗滌除去尚未結(jié)

合的抗體及一些雜質(zhì)。

2)加入待測標(biāo)本,保溫反應(yīng)。標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。

3)加酶標(biāo)抗體,保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。

4)加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過比色,測知標(biāo)本中抗原的量。在臨床檢驗(yàn)中,此法適用于檢驗(yàn)各種蛋白質(zhì)等大分子抗原,例如 HBeAg、HBsAg、hCG AFP等。只要獲得針對受檢抗原的特異性抗體,就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清,包被和酶標(biāo)所使用的抗體分別取自不同種屬的動物。如應(yīng)用單克隆抗體,一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗,分別用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物。這種雙位點(diǎn)夾心法具有很高的特異性,而且可以將受檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗體一起保溫反應(yīng),作一步檢測。

在一步法測定中,當(dāng)標(biāo)本中受檢抗原的含量很高時,過量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合,而不再形成"夾心復(fù)合物"。類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象,此時反應(yīng)后顯色的吸光值(位于抗原過剩帶上)與標(biāo)準(zhǔn)曲線(位于抗體過剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同,如按常法測讀,所得結(jié)果將低于實(shí)際的含量,這種現(xiàn)象被為鉤狀效應(yīng)(hook effect),因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)曲線到達(dá)高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時,反應(yīng)甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。因此在使用一步法試劑測定標(biāo)本中含量可異常增高的物質(zhì)(例如血清中 HBsAg、AFP 和尿液 hCG 等)時,應(yīng)注意可測范圍的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應(yīng)。

四、客戶收集樣品要求

  ·客戶需提供待檢測抗體和包被用抗原。

  ·檢測的樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清、人和動物的血清、血漿。

  ·樣本收集后應(yīng)立即-20℃保存,若長期保存應(yīng)-70℃。

  ·樣本量的要求:若一個指標(biāo)做復(fù)孔檢測應(yīng)不少于250ul,做單孔檢測應(yīng)不少于120ul。建議若客戶樣本量充足提供500ul以上。

   ·客戶的樣本收集后,立即按要求保存,切忌反復(fù)凍融。外地客戶郵寄需要用干冰運(yùn)輸。郵寄前請與溝通確認(rèn)。

五、Elisa試劑盒組成

1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×瓶 終止液 6ml×

酶標(biāo)試劑 6ml×瓶 標(biāo)準(zhǔn)品(480ng/L) 0.5ml×

酶標(biāo)包被板 12 孔×條 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×

樣品稀釋液 6ml×瓶 10 說明書 

顯色劑液 6ml×瓶 11 封板膜 

顯色劑液 6ml×1/瓶 12 密封袋 

六、Elisa試劑盒標(biāo)本要求

1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能

馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

七、操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

240ng/L 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

120ng/L 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

60ng/L 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

30ng/L 2 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

15ng/L 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育3分鐘。

4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此重復(fù)次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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